胶质细胞源性神经营养因子对精原干细胞促进作用机制的研究

作者： 胡建新 ; 宋大龙 ; 曹颖 ; 徐述雄 ; 孙兆林

摘要：目的 探讨胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF）促进精原干细胞（spermatogonial stem cells,SSCs）增殖作用的分子机制.方法 2012年1-12月合成针对GDNF基因的多个干扰性小RNA（small interfering RNA,siRNA）,以慢病毒为载体构建GDNF的慢病毒质粒,转染由日龄5～7 d SPF级健康雄性昆明小鼠睾丸组织分离出的SSCs,筛选出GDNF基因干扰效率最高的SSCs作为实验组,以GDNF基因未干扰的SSCs作为对照组.酶联免疫法分别测定两组SSCs转染后第1～4天的吸光度A值,以比较两组的增殖率.流式细胞仪检测两组SSCs的凋亡率.逆转录PCR法检测两组SSCs中GDNF、受体酪氨酸激酶（receptor tyrosine kinases,RTKs）、Fyn和局部黏着斑激酶（focal adhesion kinase,FAK）的mRNA表达.结果 实验组转染第1～4天的吸光度A值分别为0.45 ±0.02、0.68 ±0.03、1.12±0.03、2.24±0.04,对照组分别为0.46±0.03、0.73±0.02、1.32±0.05、1.15±0.06,第3、4天两组数据比较差异有统计学意义（P＜0.05）.实验组和对照组SSCs凋亡率分别为（25.43±1.91）％和（5.61±0.16）％,差异有统计学意义（P＜0.05）.实验组和对照组SSCs中GDNF、RTKs、Fyn、FAK的mRNA表达率分别为（12.32±1.22）％和（54.25±1.34）％、（16.24±1.35）％和（45.35±1.37）％、（18.32±1.34）％和（38.37±1.55）％、（20.04±1.65）％和（43.27±1.28）％,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 GDNF通过上调RTKs、Fyn和FAK的表达对SSCs的增殖起促进作用.

关键字： 精原干细胞    胶质细胞源性神经营养因子    分子机制      

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