双特异性抗肿瘤重组腺病毒对前列腺癌细胞的抑制作用

作者： 王金辉 [1] ; 张慕淳 [1] ; 李霄 [2] ; 齐延新 [2] ; 刘广臣 [3] ; 孙丹丹 [2] ; 金宁一 [2]

摘要：目的探讨结合肿瘤特异性启动子hTERTp和特异性抑癌基因Apoptin的腺病毒Ad—hTERTp—Ela—Apoptin（Ad—VT）对前列腺癌PC-3细胞的抑制作用。方法于96孔板内制备前列腺癌PC一3单层细胞（5×10^3个／孔），分别用100个感染复数（multiplicityofinfection，MOI）、10MOI和1MOI的重组腺病毒Ad—VT、Ad—CMV—Apoptin（Ad—VP3）、Ad—hTERTp—E1a—EGFP（Ad．GT）和Ad—CMV．EGFP（Ad—EGFP）进行感染，以未感染孔为对照，每个剂量设3个复孔。采用96h噻唑盐（MTT）法，检测重组腺病毒埘PC-3细胞的抑制作用。于6孔板制备PC-3单层细胞（1×10^6个／孔），分别用100MOI的Ad—VT、Ad—VP3、Ad-GT和Ad—EGFP感染PC-3细胞，培养48h后，分别应用AO／EB染色法、DAPI染色法、AnnexinV检测法对PC-3细胞进行染色，在显微镜下观察细胞形态，分析Ad-VT对PC-3细胞的抑制方式；应用Caspase榆测法对PC-3细胞提取总蛋白，检测Caspase酶活性，分析Ad-VT对PC-3细胞的抑制方式。结果MTT法结果显示除Ad．EGFP外，Ad—VT、Ad—VP3和Ad—GT均不同程度地表现出对PC-3细胞的抑制作用，其中Ad—VT、Ad—GT的抑制作用强于Ad—VP3，差异有统计学意义（P〈0．05）；培养48、72、96h，随着MOI的增高，Ad—VT对PC-3细胞的抑制作用具有一定剂量效应关系趋势，感染剂量为100MOI时，Ad．VT对PC-3细胞的抑制作用具有一定时间效应关系趋势。通过AO／EB、DAPI、AnnexinV检测法和Caspase酶活性检测结果显示，Ad—VT可通过诱导PC-3细胞的捌亡抑制PC-3细胞的增殖。其中AO／EB染色可观测到经Ad—VT感染的PC-3细胞呈现橘红色；DAPI染色可观测到经Ad—VT感染的PC-3细胞细胞核呈现亮蓝色，且存在核内物质碎裂；AnnexinV检测法可观测到经Ad—VT感染的PC．3细胞出现磷脂膜外翻、细胞核皱缩、细胞膜通透性增加等凋亡特征；Caspase检测结果显示Ad—VT可明显上调Caspase2、3、6、8�

关键字： 前列腺癌    凋亡素    重组腺病毒    凋亡      

---

上一篇：电切镜下钬激光碎石术在膀胱结石治疗中的应用
下一篇：血小板源性生长因子-D影响前列腺癌细胞迁移及相关机制的研究