Cox7a2荧光载体构建及其对小鼠支持细胞细胞色素C氧化酶活性的影响

作者： 刘保兴 [1] ; 彭胜杰 [2] ; 刘刚 [3] ; 张圣强 [1] ; 陈亮 [4] ; 王传航 [1]

摘要：目的构建pEYFP-Cl-Cox7a2表达载体，研究其在小鼠睾丸支持细胞（TM4）中的表达及对细胞色素C氧化酶（COX）活性的影响。方法应用RT—PCR方法从TM4细胞克隆Cox7a2，利用BamHI和EcoRI酶切位点将Cox7a2克隆到pEYFP—C1载体，经酶切、测序及蛋白印迹等技术进行鉴定，并将重组质粒pEYFP—C1-Cox7a2转染TM4细胞后6、12、24、48h，采用分光光度计测定COX活性。结果从TM4细胞克隆到Cox7a2基因完整的编码序列，大小为252bp。构建pEYFP—CI．Cox7a2表达载体，经酶切、测序鉴定证实克隆正确，转染TM4细胞的效率达70％，融合蛋白表达产物相对分子质量为37000。重组质粒转染后6、12、24、48h时COX活性分别为（0．642±0．051）、（0．542±0．049）、（0．311±0．021）和（0．216±0．010）U／mg，不转染组和转染空载体组分别为（0．714±0．064）、（0．653±0．031）U／mg。与不转染组相比，重组质粒转染后12、24、48h组COX活性显著降低（P〈0．05）。结论重组质粒pEYFP—Cl-Cox7a2载体成功构建。CoxTa2基因对TM4细胞COX活性具有抑制作用，可能对调控COX活性发挥重要作用。

关键字： 电子传递复合物IV    Cox7a2    pEYFP—CI载体    TM4支持细胞    COX活性      

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